Alzheimer e processi neurodegenerativi: dalla sintesi peptidica all’attività in coltura

Durante il percorso di PCTO gli studenti hanno acquisito informazioni sulla malattia di Alzheimer e sui meccanismi neurodegenerativi che la caratterizzano. Sono state approfondite tre tematiche in particolare, la cui implicazione nella malattia è nota in Letteratura. I tre temi indagati, Stress Ossidativo, fenomeno dell’Aggregazione proteica e Proteostasi sono stati affrontati sia da un punto di vista teorico che sperimentale, attraverso la presentazione e l’utilizzo di strumentazioni e tecniche comunemente usate per il loro studio. Sulla base degli argomenti trattati, sono state svolte le seguenti attività di Laboratorio:

Aggregazione proteica: Sintesi peptidica mediante tecnica in fase solida automatica assistita da microonde; Spettrometria e spettroscopia: dare un peso e un volto a ciò che studiamo; Caratterizzazione di aggregati amiloidi mediante Elettroforesi su gel e prove di tossicità in coltura.

Stress Ossidativo: Determinazione delle specie radicaliche in cellule «in live» tramite l’uso di sonde fluorescenti e rivelazione tramite microscopia digitale a fluorescenza ad alta risoluzione e citofluorimetria a flusso; Studio dell’attività e del potere anti-ossidante di molecole organiche tramite spettrofotometria; Studio dei complessi del rame con frammenti peptidici. Caratterizzazione dell’intorno di coordinazione del metallo mediante tecniche di spettrometria di massa e spettroscopiche.

Proteostasi: Saggio di attività enzimatica del proteasoma mediante analisi fluorimetrica e di spettrometria di massa; Principi generali sulla proteostasi ed introduzione alle tecniche di base di biologia cellulare, saggio di vitalità (MTT) su colture di neuroblastoma umano; Studio del meccanismo di distruzione delle membrane lipidiche modello ad opera di proteine amiloidogeniche per mezzo di Dye Leakage assay.