Studi strutturali sui principali mediatori del quorum sensing e sulla loro regolazione
Caratterizzazione strutturale e funzionale sui principali mediatori del quorum sensing (LuxRs) e delle basi strutturali della loro specificità vs promiscuità nei confronti di diversi autoinduttori. Studi strutturali sul ruolo di ligandi di rilevanza fisiologica, come modulatori dell’attività di specifici LuxRs.
Homology modelling e analisi strutturale su proteine appartenenti alla famiglia dei LuxRs, fattori trascrizionali fra i principali mediatori del quorum sensing.
Clonaggio e mutagenesi di diversi LuxRs (LasR, CviR, RhlR, LoxR e SdiA), sia specifici che promiscui nei confronti degli autoinduttori, in formato sia full lenght che di Ligand Binding Domain. Espressione ricombinante in forma solubile in fusione con his-tag, purificazione mediante sistemi cromatografici, rimozione proteolitica del tag e purificazione. Caratterizzazione strutturale delle modalità di legame degli autoinduttori nei LuxR specifici e promiscui mediante cristallografia a raggi X e dell’effetto di diversi autoinduttori sulla conformazione delle proteine full-lenght in soluzione, mediante dinamica molecolare, proteolisi limitata, DSF, Fluorescenza e SAXS.
Analisi dell’interazione dei LuxRs con ligandi di rilevanza fisiologica (i.e., flavonoidi), utilizzando cristallografia a raggi X, SAXS, DSF, fluorescenza, GCI e ITC.
– Bez C., Covaceuzach S., Bertani I., Choudhary K.S., Venturi V. LuxR solos from environmental fluorescent pseudomonads. mSphere (2021) Mar 31;6(2):e01322-20.
– Mosquito S., Meng X., Devescovi G., Bertani I., Geller A.M., Levy A., Myers M.P., Bez C., Covaceuszach S., Venturi V. LuxR Solos in the Plant Endophyte Kosakonia sp. Strain KO348. Appl Environ Microbiol. 2020 Jun 17;86(13):e00622-20.
– Kumar Patel H., Ferrante P., Covaceuszach S., Lamba D., Scortichini M., Venturi V. The kiwifruit emerging pathogen Pseudomonas syringae pv. actinidiae does not produce AHLs but possesses three LuxR solos. PLoS One (2014) 9(1):e87862
– Covaceuszach S., Degrassi G., Venturi V., Lamba D. “Structural insights on a novel interkingdom signaling circuit by cartography of the ligand-binding sites of the homologous LuxR-family.” International Journal of Molecular Science (2013) 14(10):20578
