Istituto di Cristallografia - CNR

Espressione di Proteine

Il laboratorio di Espressione di Proteine contiene tutte le strumentazioni necessarie per la produzione di proteine eterologhe da E. Coli o batteri opportunamente ingegnerizzati attraverso le comuni tecniche di biologia molecolare. La crescita dei batteri viene condotta a temperatura controllata e in condizioni di agitazione opportune (MaxQ 6000, Thermo Scientific). L’isolamento dei batteri dalle colture in sospensione, nonché la rimozione dei residui insolubili cellulari, viene realizzata mediante centrifughe refrigerate per grandi (SL-40R, Thermo Scientific) e piccoli (MicroCL-21R, Thermo Scientific) volumi. Le proteine sovra-espresse possono essere purificate mediante separazioni cromatografiche di vario genere (colonne SEC e a scambio ionico con differenti capacità di caricamento e di risoluzione) con l’ausilio di una sistema di purificazione FPLC automatizzato) opportunamente refrigerato

Cromatografia liquida per proteine ​​, Biological Duo Flow

Il sistema viene utilizzato per una rapida purificazione e caratterizzazione di una miscele proteiche. Le pompe possono arrivare fino a 3500 psi con una velocita di flusso pari a 10 ml/min. Lo strumento include un conduttimetro e un rivelatore UV insieme a un collettore di frazioni, il tutto controllato da una piattaforma software comune. È possibile caricare direttamente campioni, da piccoli (0,1 ml) a grandi (25 ml). Il sistema DuoFlow viene conservato a 4°C, garantendo così le corrette condizioni di purificazione delle proteine. L’ampio set di colonne può essere utilizzato per eseguire separazioni ioniche, ad esclusione dimensionale e cromatografia di affinità.

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