Structural characterization of extracellular matrix proteins
Caratterizzazione strutturale di proteine della matrice extracellulare (dominio amino-terminale dell’alfa distroglicano, beta distroglicano e domini LG1-2 dell’agrina) e loro mutanti patologici.
Clonaggio, mutagenesi, espressione ricombinante dei domini LG1-2 dell’agrina umana in forma solubile in fusione con la Trx, purificazione mediante sistemi cromatografici, rimozione proteolitica del tag e purificazione. Purificazione mediante sistemi cromatografici del dominio amino-terminale dell’alfa distroglicano e del beta distroglicano murini e dei loro mutanti patologici. Caratterizzazione biofisica e strutturale dell’effetto sulla conformazione di queste proteine della matrice extracellulare di mutazioni patologiche mediante dinamica molecolare, limited proteolysis, DSF, Fluorescenza, cristallografia a raggi X e SAXS.
– Signorino G., Covaceuszach S., Bozzi M., Hübner W., Mönkemöller V., Konarev P.V., Cassetta A., Brancaccio A., Sciandra F. A dystroglycan mutation (p.Cys667Phe) associated to muscle-eye-brain disease with multicystic leucodystrophy results in ER-retention of the mutant protein. Hum Mutat. (2018) Feb;39(2):266-280.
– Covaceuszach S., Bozzi M., Bigotti M.G., Sciandra F., Konarev P.V., Brancaccio A., Cassetta A. “The effect of the pathological V72I, D109N and T190M missense mutations on the molecular structure of α-dystroglycan.” PLoS One. (2017) Oct 16;12(10):e0186110. doi: 10.1371/journal.pone.0186110. eCollection 2017.
– Covaceuszach S., Bozzi M., Bigotti M.G. , Sciandra F., Konarev P., Brancaccio A., Cassetta A. Structural flexibility of human alpha-Dystroglycan. FEBS Open bio 7:1064 (2017), DOI: 10.1002/2211-5463.12259.
– Bozzi M., Cassetta A., Covaceuszach S., Bigotti M.G. , Bannister S., Hübner W., Sciandra F.,Lamba D., Brancaccio A. “The Structure of the T190M Mutant of Murine alpha-Dystroglycan at High Resolution: Insight into the Molecular Basis of a Primary Dystroglycanopathy.” PLoS One (2015) 10(5):e0124277
